S. aureus fra blodskål fra blodagar › 3-4 kolonier fra renspredning › Varmebehandlet 95 ºC › Sentrifugert › Fortynnet 1:10 og 1:100 til elektroforese To ulike stafylokokker: hver gruppe fikk enten: Prøve 2a eller 2b › På forhånd 0,5 McF bakterieoppslemming i TE-buffer 200 µl enzymbehandlet med proteinase K og lysostaphin Varmebehandlet 37 ºC 15 min Varmebehandlet 65 ºC 15 min › Gruppene ekstraherte på Qiagen kolonne 200 µl/eluerte i 100 µl (noen i 200 µl?) Neg ktr: MBG-vann Pos ktr: MRSA (CCUG 38079)
PCR produkt: › mecA: 533 bp › nuc: 279 bp DNA ladder:
Evagreen mastermiks Realtime med smeltepunktsanalyse En prøve utdelt › Hver gruppe fikk enten 3a, 3b eller 3c Oppsett: › Prøve ufortynnet › Prøve 1:10 fortynnet › Neg ktr: MBG-vann › Pos ktr: CCUG (LT+, ST+) Opplysninger › Sth/p smeltepunkt: 75,5 ± 1 °C › Lt smeltepunkt: 80,5 ± 0,5 °C
Prøvde en ny forbehandling Sidestep lysis and stabilization buffer
Utdelt en pasientprøve pr gruppe › Enten: 4a, 4b eller 4c Oppsett 1. Utdelt prøve 2. MBG-vann 3. Pos.ktr: M. tuberculosis 4. Pos. Ktr: M. intracellulare
En GBS prøve utdelt › På forhånd 0,5 McF bakterieoppslemming i TE-buffer 200 µl enzymbehandlet med lysozyme, proteinase K og mutanolysin Varmebehandlet 37 ºC 15 min Varmebehandlet 65 ºC 15 min › Gruppene ekstraherte på Qiagen kolonne 200 µl/eluerte i 100 µl (noen i 200 µl?) 10 folds fortynningsrekke fra GBS › 1:10 › 1:100 › 1: 1000 › 1: