Laste ned presentasjonen
Presentasjon lastes. Vennligst vent
1
Kloningsstratgier Bio4600
2
Kloning – isolering og oppformering av DNA- og RNA-fragmenter
Vi trenger metoder for å få tak i det interessante DNA/RNA sette det inn i egnet vektor overføre til egnet celle identifisere positive kloner
3
Genomisk bibliotek – klonsamling av DNA-fragmenter
kutt genomisk DNA med egnet restriksjonsenzym liger inn i egnet vektor overfør til egnet organisme
4
Vektorer for genomiske bibliotek
Plasmid-vektorer: ikke egnet for store genomer og store fragmenter λ- og P1 vektorer: kan ta hhv og 125 kb per klon, god transformasjonseffektivitet Cos-vektorer: både λ- og plasmidegenskaper, kan ta ~40 kb BAC- og PAC vektorer: kunstige bakteriekromosomer, kan ta 300 kb YAC-vektorer: kunstige gjærkromosomer, kan ta 1400 kb
5
cDNA-bibliotek – klonsamling av DNA komplementært til mRNA
isolering av mRNA revers transkripsjon innsetting i egnet vektor
6
Kloning av spesifikke DNA-fragmenter eller mRNA ved PCR
spesifikke primere egnet polymerase metode for å sette PCR-produkt inn i vektor
Liknende presentasjoner
