Deteksjonsmetoder for Prionprotein

Presentasjon om: "Deteksjonsmetoder for Prionprotein"— Utskrift av presentasjonen:

1 Deteksjonsmetoder for Prionprotein
* Immunhistokjemi & Western Blot * Immunoassay * Bioassay * Conformation-dependent immunoassay MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease

2 MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease
Diagnose av BSE * Makroskopiske undersøkelse av hjernen * Karakteristiske forandringer: vakuoler * Transmisjon elektronmikroskopi: scrapie-assosierte fibriller ( SAFs ), merket med gull partikler * Hurtigtester, støttemetoder A.PrPc B.PrPc og/eller PrPsc C.Fibriller av PrP 27-30 MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease

3 MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease

4 MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease
1. Immunhistokjemi * Reaksjon mellom spesifikk antistoff og antigen i vevet * Deteksjonsmarkør MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease

5 Western blot med SDS-PAGE
* Separering og detektering av protein etter størrelser * Behandles med proteinase K * SDS: denaturering av proteinene * PAGE: separering av proteinfragmentene etter størrelser * Kopierer gelavtrykket på en nitrocellulose membran * Proteinfragmentene visualiseres med spesifikk anti-Prp MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease

6 MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease
2. Immunoassay * Samme prinsipp som Western blotting * ELISA: Plastikk plate med brønner * Sandwich teknikk ( indirekte merking ) MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease

7 ELISA - sandwich teknikk
MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease

8 MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease
3. Bioassay * Overføring av BSE til dyr * Lang inkubasjonstid * Forlenget inkubasjonstid pga artsbarrieren MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease

9 4. Confomation-dependent immunoassay ( CDI )
* En prøve deles I 2 løsninger * Uten behandling, native “N” = PrPc * Denaturering “D” = PrPc+PrPsc * D-N = ? * ? Større enn “N”  BSE infeksjon MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease

10 MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease

11 MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease

12 MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease
Fordeler vs ulemper * Western blot: tidkrevende ( min. 8 timer), mye arbeid * ELISA: hurtigtest (8 timer), massetesting * Bioassay: dyr, lang inkubasjonstid * CDI: sensitiv, hurtigtest (4 timer), massetesting MNKBi 2014 The molecular basis of mad-cow disease