Diagnostikk av Limb Girdle The long and winding road.. S. Lindal Fagkonferansen 27.10.05

Muskelbiopsi Åpen biopsimetode Mer materiale, flere muligheter God kvalitet , korrekt diagnose

Det skjæres ca. 30 snitt i ulike nivå…. H&E Gomori trichrome ATP (4.3-4.5- 9.4) NADH Sur phosfatase Non-spesifikk esterase PAS Oil-red O MHC1 Ev. Metabolsk Cox/SDH PFK AMP Myophos

Restmaterialet fryses til biobank Dystrofin Alfa-dystroglycan Alfa-sarcoglycan Beta-dystroglycan Beta-sarcoglycan Delta-sarcoglycan Gamma-sarcoglycan Dysferlin Spectrin Merosin (to ulike) Emerin

Hvike grupper muskelsykdommer? Muskel dystrofier Kongenitte myopatier Inflammatoriske myopatier Metabolske myopatier Sykdommer som skyldes defekt i den nevromuskulære forbindelsen (motorisk endeplate) Nevrogene muskelsykdommer

Membranproteiner i muskelcellen (Dystrofin-relaterte proteiner) Cytoskjelett forbindelser Forbindelse mellom myofibriller og sarcolemma Ved Z-linjene og M-linjene

Dystrofin-relaterte proteiner

Immunhistokjemi - dystrofin Normal Duchenne Bærer

Immunhistokjemisk analyse Dystrofin Alfa-dystroglycan Alfa-sarcoglycan Beta-dystroglycan Beta-sarcoglycan Delta-sarcoglycan Gamma-sarcoglycan Dysferlin Spectrin Merosin (80 and 300) Emerin

Western blot Dystrophin Calpain Dysferlin Merosin Caveolin

Resultat (siden 1994) Alfa-sarcoglycan (adhalin) Beta-dystroglycan Beta-sarcoglycan Delta-sarcoglycan Gamma-sarcoglycan Spectrin

Calpain LG 2A Siden 1998 Western blot: DNA analyser: 88 Normal bands 10 pasienter med totalt manglende bånd 17 pasienter med svake calpain bånd DNA analyser: 4 pasienter med calpain mutasjon

CURRENT CLASSIFICATION OF LGMD Bushby and Beckmann, 2003  DISEASE GENE LOCUS GENE PRODUCT MW (kDa) LOCALISATION LGMD2A 15q15 (1995) Calpain 3 94 LGMD2B 2p13 (1994) Dysferlin 230 Membrane LGMD2C 13q12 (1992) α- sarcoglycan 35 Transmembrane LGMD2D 17q11-q12 β-sarcoglycan 50 Transmembrane LGMD2E 4q12 (1995) γ-sarcoglycan 43 Transmembrane LGMD2F 5q33-34(1996) δ-sarcoglycan 35 Transmembrane LGMD2G 17q11-q12 (1997) Telethonin 19 Sarcomeric LGMD2H 9q31 (1998) TRIM32 72 LGMD2I 19q13 (2001) FKRP LGMD2J 2q 24-31 Titin 4200 Sarcomeric

Grunnlag for å gjøre FKRP DNA analyse for FKRP fra pasienter med: Biopsier med svakt eller manglende calpain bånd Biopsier med partiell merosin ekspresjon Biopsier med manglende alfa-dystroglykan Biopsier med uavklarte primære muskelsykdommer Biopsier med uavklarte inflammatoriske myopatier

Konklusjon: Pr. 19.10.05 36 pasienter med fukitin relatert protein (FKRP) mutasjon 826C > A) i Norge (analysert ved Medisinsk genetikk, UNN Tromsø) 3 compound heterozygous (2 familier) Heterozygous 33 homozygote fra 28 familier Fra alle regioner i Norge

Pasientene Klinikk: Muskel biopsi 10- 52 år Lett til moderat forhøyet CK Svær variasjon I klinisk bilde (fenotype) fra et tidlig hurtig progredierende (Duchenne-like) Voksen- langsom progredierende limb-girdle phenotype Muskel biopsi Diffuse non-spesifikke myopati forandringer Nevrogene forandringer Inflammatoriske funn Metabolske funn

abnorm expresjon av α-Dystroglycan

Inflammatoriske funn Nekrotiske fibre Mononukleær betennelses infiltrat Positiv MHC1 farging

Klassifikasjon av kongenitte muskeldystrofier (MDCS) Ullrich CMD Guppe II Abnormal glycosylation of α-dystroglycan Fukuyama MDC Muscle-eye-brain-disease MDC 1C/LGMD 2I Walker-Warburg-syndrome Others rare forms MDC1A FCMD MEB FKRP/MDC1C MDC1B WWS Intergrin-α7 Deficiency DMD

Konklusjon Så Overvei DNA analyse for FKRP Pasienter med lenge pågående kronisk muskelsykdom: . Bruk nasjonalt muskelregister ! Gjør immunfarging for: α- Dystroglycan α2 Laminin Western blot for Calpain 3 Så Overvei DNA analyse for FKRP