 S. aureus fra blodskål fra blodagar › 3-4 kolonier fra renspredning › Varmebehandlet 95 ºC › Sentrifugert › Fortynnet 1:10 og 1:100 til elektroforese.

Presentasjon om: " S. aureus fra blodskål fra blodagar › 3-4 kolonier fra renspredning › Varmebehandlet 95 ºC › Sentrifugert › Fortynnet 1:10 og 1:100 til elektroforese."— Utskrift av presentasjonen:

1

2  S. aureus fra blodskål fra blodagar › 3-4 kolonier fra renspredning › Varmebehandlet 95 ºC › Sentrifugert › Fortynnet 1:10 og 1:100 til elektroforese  To ulike stafylokokker: hver gruppe fikk enten: Prøve 2a eller 2b › På forhånd  0,5 McF bakterieoppslemming i TE-buffer  200 µl enzymbehandlet med proteinase K og lysostaphin  Varmebehandlet 37 ºC 15 min  Varmebehandlet 65 ºC 15 min › Gruppene ekstraherte på Qiagen kolonne 200 µl/eluerte i 100 µl (noen i 200 µl?)  Neg ktr: MBG-vann  Pos ktr: MRSA (CCUG 38079)

3  PCR produkt: › mecA: 533 bp › nuc: 279 bp  DNA ladder:

4

5

6

7

8  Evagreen mastermiks  Realtime med smeltepunktsanalyse  En prøve utdelt › Hver gruppe fikk enten 3a, 3b eller 3c  Oppsett: › Prøve ufortynnet › Prøve 1:10 fortynnet › Neg ktr: MBG-vann › Pos ktr: CCUG 38079 (LT+, ST+)  Opplysninger › Sth/p smeltepunkt: 75,5 ± 1 °C › Lt smeltepunkt: 80,5 ± 0,5 °C

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20  Prøvde en ny forbehandling Sidestep lysis and stabilization buffer

21

22  Utdelt en pasientprøve pr gruppe › Enten: 4a, 4b eller 4c  Oppsett 1. Utdelt prøve 2. MBG-vann 3. Pos.ktr: M. tuberculosis 4. Pos. Ktr: M. intracellulare

23

24

25

26

27

28

29

30

31

32

33

34  En GBS prøve utdelt › På forhånd  0,5 McF bakterieoppslemming i TE-buffer  200 µl enzymbehandlet med lysozyme, proteinase K og mutanolysin  Varmebehandlet 37 ºC 15 min  Varmebehandlet 65 ºC 15 min › Gruppene ekstraherte på Qiagen kolonne 200 µl/eluerte i 100 µl (noen i 200 µl?)  10 folds fortynningsrekke fra GBS › 1:10 › 1:100 › 1: 1000 › 1: 10 000

35

36

37

38

39

40

41

42

43

44

45