Utstyr til gel-elektroforese Vekt (deles med andre grupper) Agarose pulver Plast-skje Papirbit Destillert vann (deles med andre) 50xTAE buffer (deles med.

Presentasjon om: "Utstyr til gel-elektroforese Vekt (deles med andre grupper) Agarose pulver Plast-skje Papirbit Destillert vann (deles med andre) 50xTAE buffer (deles med."— Utskrift av presentasjonen:

1 Utstyr til gel-elektroforese Vekt (deles med andre grupper) Agarose pulver Plast-skje Papirbit Destillert vann (deles med andre) 50xTAE buffer (deles med annen gruppe) Målesylinder Kolbe Automatpipette Pipettespisser 1

2 LAGE AGAROSE-GEL nok til fire geler Vei opp 0,8 gram agarose på en papirlapp Ha agarosen over i en 250ml kolbe Tilsett 3 ml (5x200  l) 50xTAE buffer Tilsett 147 ml destillert vann Varm i mikro på høy effekt ca 30 sek. Med et tørkepapir i hånden; ta ut og bland innholdet forsiktig med en svingebevegelse av kolben. Varm i mikro ytterligere ca 40 sek til all agarosen er løst opp og det har begynt å koke. Ikke kok over! Ta ut kolben (bruk papir så du ikke brenner deg) og avkjøl litt kolben under rennende kaldt vann (ikke få vann oppi!) 2

3 Støpe agarosegel Når agarose-løsningen er avkjølt (ca 55 o C) helles den forsiktig oppi gelkaret som er klargjort som vist på bildet, ca 45 ml per gel. Pass på så det ikke blir bobler i gelen. Eventuelle bobler kan pirkes bort med en pipettespiss. La gelen stå til avkjøling ca 20 min, til den stivner. 3

4 Klargjøre gel til applisering Når gelen er stivnet, skal den klargjøres til applisering av DNA- prøver. Ta forsiktig opp gel- kammen (blå, bilde 1). Fjern forsiktig de svarte gummi-listene (bilde 2). Sett gelen i gel-karet som er fylt med 1xTAE buffer. Appliser en DNA-prøve i hver brønn (30  l pr brønn, bilde 3). 1 1 2 2 3 3 4

5 Kjøring av agarosegel Gelen vil kjøres sammen med andre geler i samme gel-kar. Newtonlærer vil sette den i gang og gjøre innstillingene på strømkilden. Det vil brukes en spenning på mellom 90 og 125 V. Kjøretiden vil være ca 30 min. 5

6 Hvem er far? Dette forsøket brukes DNA fingeravtrykksanalyser for å identifisere de biologiske foreldrene til to gutter som kom bort fra sine foreldrene i en kaotisk tid. Guttene var fettere, født med to måneders mellomrom og veldig like utseendemessig. Mødrene var halvsøstre med felles mor (se slektskapstreet). Gutt 1: Gutt 2: 6

7 Dette ble gjort: Ti kvinner pekte seg ut som mulige mødre til guttene, og DNA- fingeravtrykksanalyser basert på mitokondrielt DNA ble utført siden mitokondrie-DNA kun nedarves fra mor til barn. Testen viste som ventet at guttene hadde den samme mitokondrieprofilen, og at denne matchet profilen til to av de ti kvinnene. Deretter ble det gjort fingeravtrykks-analyser av kromosomale DNA-prøver fra barna, mødrene og den ene, gjenlevende faren. Oppgaven er å separere disse behandlete DNA-prøvene ved elektroforese og deretter analysere og sammenlikne båndmønstrene for å identifisere guttenes respektive, biologiske foreldre. 7

8 Analyse av gelen Sammenlign DNA-profilene (de genetiske fingeravtrykkene) til de to mødrene (brønn 2 og 3), barna (brønn 4 og 5) og faren (brønn 6) og bestem hvem som er biologiske foreldre til de to guttene. Hvem er det av Smith og Obama som vi har fars DNA til? Hva representerer de ulike fargede båndene som ble separert ved elektroforese? 8